志賀氏菌（Shigelia）引起的細(xì)菌性痢疾常發(fā)現(xiàn)于人員大量集中的地方，如餐廳和食堂。與其相關(guān)的食品包括色拉、生蔬菜、奶和奶制品、肉禽、水果和面包制品等。本公司自主研發(fā)的志賀氏菌活菌檢測(cè)試劑盒能快速特異地檢測(cè)出此類食品中含有的志賀氏菌，且相比DNA-PCR的檢測(cè)方法，本檢測(cè)方法可以區(qū)分死菌和活菌，因此不需要進(jìn)行再次驗(yàn)證。本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應(yīng)對(duì)食品中的志賀氏菌進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度高，特異性強(qiáng)，適用于乳制品、肉制品中志賀氏菌的定性檢測(cè)。

產(chǎn)品規(guī)格

40次/盒

主要成分

儲(chǔ)存條件

本試劑盒保存于-20℃，有效期12個(gè)月。

檢測(cè)步驟

1.樣本處理取25ml(g)樣品，加入 225ml的培養(yǎng)基，均質(zhì)后于 37 度增菌培養(yǎng)約 6h。

2.樣本RNA 提取取1ml增菌液，采用商品化的細(xì)菌 RNA提取試劑盒，按照試劑盒說(shuō)明提取樣本 RNA 。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA 待用。

3.試劑準(zhǔn)備冰上解凍反應(yīng)試劑，反應(yīng)液保持避光，解凍后將反應(yīng)液混勻并簡(jiǎn)短離心，按每管15ul的量分裝至 PCR管中。

4.PCR加樣每管中加入cDNA樣本 10ul，蓋好管蓋，簡(jiǎn)短離心，同時(shí)做陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照和空白對(duì)照（以水代替樣本 cDNA ）。

5.PCR擴(kuò)增將加好的樣品放置在PCR儀中， 熒光通道選擇FAM， PCR 反應(yīng)參數(shù)見(jiàn)表，使用不同的PCR儀，反應(yīng)參數(shù)可適當(dāng)調(diào)整。

6.結(jié)果分析

基線和閾值的設(shè)置：基線范圍設(shè)置在3-15個(gè)循環(huán)，閾值設(shè)置在基線剛好超過(guò)陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。

質(zhì)量控制：陽(yáng)性對(duì)照CT≤30，有S 型擴(kuò)增曲線；陰性對(duì)照無(wú)CT值，擴(kuò)增曲線為直線；空白對(duì)照無(wú)CT值，擴(kuò)增曲線為直線。若出現(xiàn)任一結(jié)果不正常，需重做實(shí)驗(yàn)。

結(jié)果判定

1.檢測(cè)樣品無(wú)CT值，曲線為直線或無(wú)S 型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陰性。

2.檢測(cè)樣品CT≤35，出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽(yáng)性。

3.檢測(cè)樣品35﹤CT﹤40并有S型擴(kuò)增曲線，需適當(dāng)增加DNA模板量后重新做實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)，再次檢測(cè)結(jié)果CT值仍處于35和40之間，并且有S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽(yáng)性，否則判定為陰性。

最低檢測(cè)限

5cfu/25g(ml)

注意事項(xiàng)

1.初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

2.實(shí)驗(yàn)操作要嚴(yán)格分區(qū)，防止污染。

3.RNA提取時(shí)要使用無(wú)RNA酶的槍頭和管子，防止RNA降解。

4.反應(yīng)液反復(fù)凍融會(huì)降低靈敏度，建議分管保存。

5.本試劑盒僅供定性篩查用。