阪崎腸桿菌（Enterobactersakazaii）是奶粉（乳）制品中新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。由其引發(fā)的嬰兒、早產(chǎn)兒腦膜炎、敗血癥及壞死性結(jié)腸炎散發(fā)和暴發(fā)的病例已在全球相繼出現(xiàn)。本公司自主研發(fā)的阪崎腸桿菌核酸檢測(cè)試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)阪崎腸桿菌基因的核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光 PCR反應(yīng)對(duì)奶粉（乳）制品中的阪崎腸桿菌進(jìn)行定性檢測(cè)，靈敏度高，特異性強(qiáng)，能快速檢測(cè)出奶粉（乳）制品中的阪崎腸桿菌。

試劑盒組成

檢測(cè)步驟

1.樣本處理取100g(ml)樣品，加入900ml 的無(wú)菌蒸餾水，震蕩溶解，與 37度培養(yǎng)15h 左右。移取 1ml轉(zhuǎn)入 10ml 改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯中， 37度震蕩培養(yǎng)約5h 。

2.樣本DNA提取取1.5ml增菌液，采用商品化的細(xì)菌DNA 提取試劑盒，按照試劑盒說(shuō)明提取樣本 DNA。對(duì)提取的DNA 進(jìn)行濃度測(cè)定， DNA溶液的OD260/280 比值在 1.7-2.0 為最佳。

3.試劑準(zhǔn)備冰上解凍反應(yīng)試劑，反應(yīng)液保持避光，解凍后將反應(yīng)液混勻并簡(jiǎn)短離心，按每管20ul的量分裝至PCR 管中。

4.PCR加樣每管中加入DNA樣本5ul ，蓋好管蓋，簡(jiǎn)短離心，同時(shí)做陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照和空白對(duì)照（以水代替樣本 DNA）。

5.PCR擴(kuò)增將加好的樣品放置在PCR 儀中，熒光通道選擇FAM ， PCR 反應(yīng)參數(shù)見(jiàn)表，使用不同的PCR 儀，反應(yīng)參數(shù)可適當(dāng)調(diào)整。

6.結(jié)果分析

基線和閾值的設(shè)置：基線范圍設(shè)置在3-15個(gè)循環(huán)，閾值設(shè)置在基線剛好超過(guò)陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。

質(zhì)量控制：陽(yáng)性對(duì)照CT≤30，有S 型擴(kuò)增曲線；陰性對(duì)照無(wú)CT值，擴(kuò)增曲線為直線；空白對(duì)照無(wú)CT值，擴(kuò)增曲線為直線。若出現(xiàn)任一結(jié)果不正常，需重做實(shí)驗(yàn)。

結(jié)果判定

1.檢測(cè)樣品無(wú)CT值，曲線為直線或無(wú)S 型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陰性。

2.檢測(cè)樣品CT≤35，出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽(yáng)性。

3.檢測(cè)樣品35﹤CT ﹤40并有S型擴(kuò)增曲線，需適當(dāng)增加DNA模板量后重新做實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)，再次檢測(cè)結(jié)果CT值仍處于35和40之間，并且有S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽(yáng)性，否則判定為陰性。檢出限

4cfu/ml(g)

包裝規(guī)格

 40次/盒

注意事項(xiàng)

1.初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，并嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2.實(shí)驗(yàn)操作要嚴(yán)格分區(qū)，防止污染。

3.反應(yīng)液反復(fù)凍融會(huì)降低靈敏度，建議分管保存。

4.本試劑盒僅供定性篩查用。

5.篩選陽(yáng)性的樣本需按國(guó)標(biāo)法進(jìn)行確證。

儲(chǔ)藏條件與有效期

本試劑盒保存于-20℃，有效期 12個(gè)月。