本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)FMV35S基因的核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針，通過實(shí)時(shí)熒光PCR 反應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行定性檢測(cè)。本試劑盒適用于大豆、玉米、番茄、馬鈴薯、水稻、小麥等農(nóng)產(chǎn)品及其加工產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分的定性PCR檢測(cè)，加工產(chǎn)品不包含食用油脂和調(diào)味品。

參考標(biāo)準(zhǔn) 

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SNT 1202-2010 

產(chǎn)品規(guī)格 

40次/盒

主要成分 

儲(chǔ)存條件 

本試劑盒保存于-20℃，有效期12個(gè)月 

檢測(cè)步驟 

1.樣本處理 采用均質(zhì)器、攪拌機(jī)、研缽等實(shí)驗(yàn)器皿對(duì)樣本進(jìn)行均質(zhì)處理。

2.樣本DNA提取采用商品化的植物基因組DNA提取試劑盒，按照試劑盒說明提取樣本DNA。對(duì)提取的DNA進(jìn)行濃度測(cè)定，DNA溶液的OD260/280比值在1.7-2.0為最佳。

3.試劑準(zhǔn)備 冰上解凍反應(yīng)試劑，反應(yīng)液保持避光，解凍后將反應(yīng)液混勻并簡(jiǎn)短離心，按每管22ul的量分裝至PCR管中。

4.PCR加樣每管中加入DNA樣本3ul（DNA濃度為50ng/ul左右），蓋好管蓋，簡(jiǎn)短離心，同時(shí)做陽性對(duì)照，陰性對(duì)照和空白對(duì)照（以水代替樣本DNA）。

 5.PCR擴(kuò)增將加好的樣品放置在PCR儀中，熒光通道選擇FAM， PCR反應(yīng)參數(shù)見表，使用不同的PCR儀，反應(yīng)參數(shù)可適當(dāng)調(diào)整。

結(jié)果分析 

基線和閾值的設(shè)置：基線范圍設(shè)置在3-15個(gè)循環(huán)，閾值設(shè)置在基線剛好超過陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。

質(zhì)量控制：陽性對(duì)照CT≤30，有S型擴(kuò)增曲線；陰性對(duì)照無CT值，擴(kuò)增曲線為直線；空白對(duì)照無CT值，擴(kuò)增曲線為直線。若出現(xiàn)任一結(jié)果不正常，需重做實(shí)驗(yàn)。 

結(jié)果判定 

1.檢測(cè)樣品無CT值，曲線為直線或無S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陰性。

 2.檢測(cè)樣品CT≤36，出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽性。

 3.檢測(cè)樣品36﹤CT﹤40并有S型擴(kuò)增曲線，需適當(dāng)增加DNA模板量后重新做實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)，再次檢測(cè)結(jié)果CT值仍處于36和40之間，并且有S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽性，否則判定為陰性。 

最低檢測(cè)限 

 0.1%

注意事項(xiàng) 

1.初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

2.實(shí)驗(yàn)操作要嚴(yán)格分區(qū)，防止污染。

3.建議先用實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)內(nèi)源基因來判定樣本提取的DNA是否滿足PCR檢測(cè)要求。

4.反應(yīng)液反復(fù)凍融會(huì)降低靈敏度，建議分管保存。

5.本試劑盒僅供定性篩查用。